灭菌前后培养基pH值差异的原因

一、灭菌时间和温度

在高压湿热灭菌时，长时间的高温会对培养基产生很多不利的影响，例如会导致营养成分遭到破坏，进而影响微生物生长。同时还可能引起培养基颜色变化、透明度降低、琼脂凝胶强度变化等。培养基在灭菌过程中，灭菌的温度和时间，高压灭菌器升温、降温的速率，灭菌容器的容积和装载方式等因素都对培养基的灭菌有着重要影响。

二、培养基的成分

不同的成分在灭菌过程中对培养基ph值有着不同的影响。糖类和蛋白胨是培养基中最常见的两种重要成分。

糖类，例如葡萄糖、乳糖等作为碳源被微生物所利用。糖类在高温条件下会产生有机酸使培养基pH值下降。一般情况下，培养基含糖量越高，灭菌后pH值下降越多。如果过度灭菌pH值变化会更加明显。同时，糖类在高温下易发生焦化，生成微生物无法利用的物质，使培养基颜色加深。

蛋白胨一般作为培养基氮源，为微生物的生长提供营养物质。蛋白胨在培养基灭菌时还能对培养基的pH值变化起到一定的缓冲作用。一般含胨量高的培养基，灭菌前后pH值变化相对较小。

糖类和蛋白胨类同时存在时高温下还可能发生美拉德反应，产生微生物无法利用甚至有害的物质。

三、测量pH值时的温度

 同一培养基在不同温度下测得的pH值也会有一定差异，一般培养基的pH值会随着测量时温度的升高而降低。培养基灭菌之后未完全冷却时，测量的pH值一般会偏低，这是由于温度升高时溶液中的游离离子数增多，测得的pH值较低；反之，当温度降低时游离离子数减少，测得的pH值较高。通常我们在测定培养基pH值时，温度控制在25℃左右。

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